Plásmido Doble Nickase (h) GTBP: sc-404192-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GTBP consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GTBP (h) y el plásmido de doble nickasa GTBP (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MSH6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GTBP Anticuerpo (E-8): sc-137015
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GTBP | sc-404192-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GTBP | sc-404192-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MSH6 codifica el factor de reparación de errores de apareamiento del ADN GTBP, que forma el complejo MutSα con MSH2 para reconocer desajustes base–base y pequeños bucles de inserción–deleción generados durante la replicación y la recombinación del ADN. Tras la detección de la lesión, MutSα coordina los eventos de reparación posteriores mediante el reclutamiento de MLH1–PMS2 y factores de procesamiento asociados, lo que ayuda a mantener la estabilidad del genoma y a limitar la acumulación de mutaciones. La alteración de la reparación de errores de apareamiento dependiente de MSH6 contribuye a la inestabilidad de microsatélites y eleva la mutagénesis espontánea, vinculando la disfunción de GTBP con la predisposición al cáncer hereditario y esporádico. Como componente central de las vías de reparación del ADN y de fidelidad de la replicación, MSH6 se estudia ampliamente en los mecanismos de mutagénesis, tolerancia al daño del ADN y respuestas de puntos de control.
GTBP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MSH6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MSH6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MSH6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MSH6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.