Plásmido Doble Nickase (h) GRIP-1: sc-401800-NIC

NCOA2 codifica GRIP-1 (coactivador 2 de receptores nucleares), un corregulador transcripcional que acopla receptores nucleares unidos a ligando con la maquinaria de remodelación de cromatina y con la ARN polimerasa II para modular programas de expresión génica. GRIP-1 interactúa con receptores de hormonas esteroideas y otros factores de transcripción para influir en decisiones de destino celular, la homeostasis metabólica y la señalización del desarrollo mediante el ensamblaje de complejos coactivadores y una transcripción dependiente de la acetilación de histonas. Como regulador nodal de la transcripción sensible a hormonas, NCOA2 se estudia en contextos en los que un equilibrio alterado de coactivadores perturba programas de diferenciación y proliferación. La desregulación o los reordenamientos de NCOA2 se han implicado en circuitos transcripcionales oncogénicos y en cambios de expresión génica específicos de linaje, lo que impulsa estudios mecanísticos de la función de GRIP-1 en modelos relevantes para la enfermedad.

GRIP-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NCOA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NCOA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NCOA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NCOA2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.