Plásmido Doble Nickase (h) GPRC5D: sc-403114-NIC

GPRC5D (receptor acoplado a proteína G, clase C, grupo 5, miembro D) es un GPCR huérfano humano con una expresión destacada en compartimentos epiteliales diferenciados, donde se asocia con la regulación del estado celular, las respuestas al estrés y programas de señalización dependientes del contexto. Como proteína tipo receptor de membrana, GPRC5D está en posición de modular vías aguas abajo que se integran con MAPK y otras redes de señalización asociadas a GPCR, influyendo en las salidas transcripcionales y la adaptación celular. Se ha informado de una expresión alterada de GPRC5D en varios contextos de enfermedad, incluidas neoplasias malignas, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar marcadores de linaje, señalización mediada por receptores y regulación génica asociada a tumores. Sus patrones de expresión restringidos también respaldan investigaciones sobre especificidad de tipo celular y biología de proteínas de superficie en modelos humanos.

GPRC5D El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPRC5D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPRC5D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPRC5D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPRC5D alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.