Plasmide CRISPR d'Activation (m) GPR34: sc-423884-ACT

Le gène murin *Gpr34* code GPR34, un récepteur couplé aux protéines G de classe A de type rhodopsine, enrichi dans les lignées immunitaires et myéloïdes, notamment les microglies. La signalisation de GPR34 a été associée à la modulation de la chimiotaxie, du tonus inflammatoire et des voies GPCR dépendantes de l’AMPc, qui façonnent l’activation de l’immunité innée et le comportement des macrophages résidents des tissus. Dans le système nerveux central, GPR34 contribue à l’homéostasie microgliale et aux réponses aux signaux liés aux lésions, en interaction avec les processus de neuroinflammation. Une signalisation GPCR altérée via GPR34 a été étudiée dans des contextes de maladies inflammatoires et de biologie myéloïde associée aux tumeurs, soutenant son utilisation comme outil d’exploration des mécanismes de régulation immunitaire.

GPR34 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gpr34 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR34 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gpr34 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gpr34, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR34. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gpr34 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR34 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR34 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gpr34 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.