Plásmido CRISPR de Activación (h) GPIHBP1: sc-403473-ACT

GPIHBP1 (proteína 1 de unión a lipoproteínas de alta densidad anclada a glicosilfosfatidilinositol) es una proteína anclada por GPI en la superficie de las células endoteliales que captura la lipoproteína lipasa (LPL) y la transporta hacia la luz capilar, permitiendo la hidrólisis intravascular de lipoproteínas ricas en triglicéridos. Mediante su unión a la LPL y sus interacciones con los quilomicrones y las VLDL, GPIHBP1 es un componente central de la vía de la lipólisis y de la regulación del aclaramiento de triglicéridos plasmáticos. Las alteraciones en la expresión o la función de GPIHBP1 modifican la localización y la actividad de la LPL, contribuyendo a fenotipos de dislipidemia caracterizados por hipertrigliceridemia y defectos en el manejo de lípidos. Por ello, este gen se estudia ampliamente en el metabolismo lipídico vascular, la biología endotelial y los mecanismos que gobiernan el procesamiento de lipoproteínas.

GPIHBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPIHBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPIHBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPIHBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPIHBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPIHBP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPIHBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPIHBP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPIHBP1 en células tumorales con expresión de GPIHBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.