Plásmido CRISPR de Activación (h) GPAM: sc-403961-ACT

La GPAM humana (aciltransferasa de glicerol-3-fosfato, mitocondrial) cataliza el paso inicial y limitante de la velocidad de la síntesis *de novo* de glicerolípidos al convertir glicerol-3-fosfato y acil-CoA de cadena larga en ácido lisofosfatídico. Esta actividad enzimática vincula el manejo mitocondrial de lípidos con la producción de ácido fosfatídico, el ensamblaje de triacilglicéridos y la remodelación más amplia de fosfolípidos, influyendo así en la biogénesis de membranas y la formación de gotículas lipídicas. GPAM funciona en la intersección entre la utilización de ácidos grasos y la homeostasis energética, con efectos posteriores sobre lípidos de señalización y el equilibrio de las redes metabólicas. Las alteraciones en la expresión o la actividad de GPAM se han asociado con fenotipos de metabolismo lipídico desregulado relevantes para la esteatosis hepática, la resistencia a la insulina y vías de riesgo cardiometabólico, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos en biología metabólica.

GPAM El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPAM sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPAM El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPAM en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPAM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPAM. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPAM y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPAM en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPAM en células tumorales con expresión de GPAM silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.