Partículas Lentivirales de Activación (h) Glutathione Peroxidase 4/GPX4: sc-401558-LAC

GPX4 (glutatión peroxidasa 4) codifica una hidroperoxidasa de fosfolípidos dependiente de selenio que reduce los hidroperóxidos lipídicos de membrana y limita la propagación de la peroxidación lipídica. Como supresor central de la ferroptosis, GPX4 vincula el metabolismo del glutatión y la homeostasis redox con la integridad mitocondrial, el estrés oxidativo dependiente del hierro y la señalización inflamatoria. Las alteraciones en la actividad de GPX4 se han asociado con la susceptibilidad al daño oxidativo y con la desregulación de programas de muerte celular implicados en la neurodegeneración, el daño por isquemia-reperfusión y la biología tumoral. Por ello, la GPX4 humana se estudia ampliamente en vías que controlan las ROS lipídicas, la reparación de membranas y las respuestas transcripcionales adaptativas al estrés.

Las partículas de activación lentiviral Glutathione Peroxidase 4/GPX4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de GPX4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Glutathione Peroxidase 4/GPX4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción GPX4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Glutathione Peroxidase 4/GPX4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo GPX4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.