Plásmido CRISPR de Activación (h) Glutathione Peroxidase 1/GPX1: sc-400631-ACT

GPX1 codifica la glutatión peroxidasa 1, una selenoenzima citosólica que reduce el peróxido de hidrógeno y los hidroperóxidos orgánicos utilizando glutatión, limitando así el daño oxidativo a proteínas, lípidos y ADN. Al controlar el tono redox intracelular, GPX1 influye en la señalización de las especies reactivas de oxígeno, el metabolismo del glutatión y las vías de respuesta al estrés que determinan la función mitocondrial, la apoptosis y la señalización inflamatoria. La alteración de la expresión o la actividad de GPX1 se ha asociado con fenotipos de estrés oxidativo observados en la biología del cáncer, la neurodegeneración, la disfunción metabólica y la investigación cardiovascular. Como enzima antioxidante ampliamente expresada, GPX1 constituye un nodo útil para analizar cómo la homeostasis redox modula las decisiones del destino celular y las respuestas adaptativas al estrés.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Glutathione Peroxidase 1/GPX1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Glutathione Peroxidase 1/GPX1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Glutathione Peroxidase 1/GPX1 en células tumorales con expresión de GPX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.