Plasmide CRISPR/Cas9 KO Glucosidase I (h): sc-405014

Présentation

MOGS code la glucosidase I, une enzyme luminale du réticulum endoplasmique (RE) qui initie le traitement des glycannes N-liés en retirant le glucose terminal lié en α-1,2 du Glc₃Man₉GlcNAc₂ sur les glycoprotéines naissantes. Cette étape précoce d’élagage coordonne l’entrée dans le cycle de contrôle qualité calnexine/calréticuline, influençant le repliement des protéines, la dégradation associée au RE (ERAD) et la maturation de la voie sécrétoire. La perturbation de MOGS dérègle la protéostasie et modifie la composition des glycoprotéines à la surface cellulaire et parmi les protéines sécrétées, avec des effets en aval sur le trafic des récepteurs et la reconnaissance immunitaire. Des variations génétiques ou la perte de fonction de la glucosidase I ont été associées à des troubles congénitaux de la glycosylation et, plus largement, à des phénotypes liés au stress du RE, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les processus cellulaires dépendants des glycoprotéines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Glucosidase I (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MOGS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MOGS, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MOGS à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Glucosidase I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MOGS pour l'étude de la signalisation de Glucosidase I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MOGS essentiels à la fonction de Glucosidase I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MOGS pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Glucosidase I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Glucosidase I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MOGS. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Glucosidase I plasmide HDR (h) et le Glucosidase I (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MOGS pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MOGS définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.