Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glucosidase I: sc-405014-ACT

MOGS code la glucosidase I, une α‑glucosidase résidente du réticulum endoplasmique (RE) qui catalyse la première étape d’élagage des résidus glucose lors de la maturation des N‑glycanes sur les glycoprotéines naissantes. Cette activité est au cœur du contrôle qualité du RE, en influençant le repliement assisté par la calnexine/la calréticuline, l’aptitude à la sécrétion et la dégradation associée au RE (ERAD) des protéines mal repliées. En façonnant la maturation des glycoprotéines, MOGS affecte la protéostasie ainsi que les réponses cellulaires au stress du RE et la réponse aux protéines mal conformées (UPR). Une altération de la fonction de MOGS a été associée à des troubles congénitaux de la glycosylation et peut moduler les interactions hôte–pathogène via ses effets sur la maturation des glycoprotéines d’enveloppe virale, ce qui souligne son importance en glycobiologie et dans les recherches liées aux infections.

Glucosidase I Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MOGS sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glucosidase I Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MOGS dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MOGS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glucosidase I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MOGS natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glucosidase I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glucosidase I dans les cellules tumorales présentant une expression de MOGS silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.