Glucose Transporter Glut1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400174-ACT

SLC2A1 codifica il trasportatore del glucosio 1 (GLUT1), un trasportatore di membrana facilitativo che media l’assorbimento basale di glucosio attraverso la membrana plasmatica e sostiene il flusso glicolitico in diverse condizioni nutritive. L’attività di GLUT1 è strettamente legata all’omeostasi energetica, al metabolismo responsivo all’ipossia e all’ingresso del carbonio nelle vie biosintetiche, come la via del pentoso fosfato, per il controllo redox e la produzione di nucleotidi. La regolazione di SLC2A1 si intreccia con programmi di segnalazione e trascrizionali, incluse le risposte dipendenti da HIF-1 e una più ampia riprogrammazione metabolica durante lo stress cellulare. L’alterazione dell’espressione di GLUT1 e dell’utilizzo del glucosio è ampiamente studiata in contesti di disfunzione metabolica e rimodellamento proliferativo, offrendo un riferimento meccanicistico per indagare fenotipi dipendenti dal trasporto di nutrienti.

Glucose Transporter Glut1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC2A1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Glucose Transporter Glut1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC2A1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC2A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Glucose Transporter Glut1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC2A1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Glucose Transporter Glut1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Glucose Transporter Glut1 nelle cellule tumorali con espressione di SLC2A1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.