Plasmide CRISPR d'Activation (h2) GLT6D1: sc-415678-ACT-2

Le gène humain GLT6D1 (glycosyltransferase 6 domain containing 1) code une glycosyltransférase putative résidente de l’appareil de Golgi, impliquée dans la biosynthèse et le remodelage des glycoconjugués, influençant ainsi la glycosylation des protéines et la composition en glucides de la surface cellulaire. Par ses effets sur la maturation des glycanes, GLT6D1 est susceptible de moduler le trafic de la voie sécrétoire, les interactions avec la matrice extracellulaire et les processus de signalisation médiés par des récepteurs qui dépendent de motifs spécifiques de glycosylation. Des variations génétiques et une régulation altérée de GLT6D1 ont été associées, dans des études chez l’humain, à une susceptibilité à la maladie parodontale, ce qui souligne sa pertinence pour les interactions hôte–microbe et le remodelage inflammatoire des tissus dans la cavité buccale. L’édition du gène GLT6D1 et les outils de génomique fonctionnelle permettent d’examiner des phénotypes dépendants de la glycosylation, notamment des modifications de l’adhérence cellulaire, de la signalisation liée à l’immunité et des profils glycoprotéomiques dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

GLT6D1 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GLT6D1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GLT6D1 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GLT6D1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GLT6D1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GLT6D1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GLT6D1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GLT6D1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GLT6D1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GLT6D1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.