Plásmido CRISPR de Activación (m) GLCNE: sc-424509-ACT

El gen **Gne** del ratón codifica la **glucosamina (UDP-N-acetil)-2-epimerasa/N-acetilmanosamina quinasa (GLCNE)**, una enzima bifuncional y limitante de la velocidad en la vía de biosíntesis *de novo* del ácido siálico que convierte **UDP-GlcNAc** en **ManNAc-6-fosfato**. Al controlar las reservas celulares de **CMP–ácido siálico**, GLCNE influye en la sialilación de proteínas y lípidos, lo que determina la maduración de glucoproteínas en la vía secretora y modula el reconocimiento y la adhesión célula–célula, así como la señalización de receptores en la membrana plasmática. La actividad alterada de **Gne** y la homeostasis de la sialilación se asocian con defectos en la fisiología muscular y con respuestas más amplias de estrés vinculadas a la glicosilación, que afectan la señalización inflamatoria y las interacciones con la matriz extracelular. Estas características biológicas hacen de **Gne** un objetivo útil para estudiar la regulación dependiente de la sialilación de proteínas de membrana, el tráfico y la composición de los glicoconjugados en sistemas modelo de ratón.

GLCNE El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Gne sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GLCNE El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Gne en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Gne, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GLCNE. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Gne y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GLCNE en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GLCNE en células tumorales con expresión de Gne silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.