GGPS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404003-ACT

ヒトのGGPS1は、タンパク質プレニル化および下流のイソプレノイド生合成に必要なゲラニルゲラニルピロリン酸（GGPP）を産生するメバロン酸経路の主要酵素であるゲラニルゲラニル二リン酸合成酵素1をコードしています。GGPPを供給することで、GGPS1は小型GTPアーゼをはじめとするプレニル化タンパク質の膜局在化とシグナル伝達を支え、小胞輸送、細胞骨格ダイナミクス、ミトコンドリア機能、さらに広範な代謝恒常性に影響を与えます。GGPS1に関連するプレニル化の撹乱は、増殖やストレス応答シグナルの制御異常と関連づけられており、メバロン酸フラックスおよびプレニル化依存性経路が疾患関連の表現型に寄与する状況で頻繁に研究されています。その結果、GGPS1は、細胞モデルにおける脂質代謝とシグナル伝達のクロストーク、プロテオスタシス、ならびに経路の脆弱性を検討するうえで有用な結節点となります。

GGPS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GGPS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GGPS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GGPS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGGPS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GGPS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGGPS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGGPS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGGPS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGGPS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。