Plasmide CRISPR d'Activation (h) Gfi-1B: sc-403883-ACT

GFI1B code pour le répresseur transcriptionnel Gfi-1B, une protéine à doigts de zinc essentielle au développement hématopoïétique et à la spécification des lignages, en particulier au sein des programmes érythroïde et mégacaryocytaire. Par ses interactions avec des complexes de modification de la chromatine tels que LSD1/RCOR/HDAC, Gfi-1B façonne des réseaux transcriptionnels qui régissent la prolifération, la différenciation et la maturation des progéniteurs. Son activité s’intègre à celle des régulateurs hématopoïétiques centraux pour contrôler des programmes d’expression génique impliqués dans la formation des plaquettes et le développement des globules rouges. Une expression ou une fonction dérégulée de GFI1B a été associée à des troubles plaquettaires héréditaires et à des perturbations plus larges de l’homéostasie hématopoïétique, pertinentes pour la recherche sur les hémopathies malignes.

Gfi-1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GFI1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Gfi-1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GFI1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GFI1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Gfi-1B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GFI1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Gfi-1B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Gfi-1B dans les cellules tumorales présentant une expression de GFI1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.