Plásmido CRISPR de Activación (h) GCNT4: sc-412177-ACT

GCNT4 (transferasa 4 de glucosaminilo [N-acetil]) codifica una glicosiltransferasa residente del aparato de Golgi que cataliza la ramificación β1,6 de N-acetilglucosamina en O-glicanos de tipo mucina, moldeando la estructura y la abundancia de glicoconjugados complejos en la superficie celular y en las mucinas secretadas. Al modular la ramificación de los glicanos, GCNT4 influye en el tráfico de glicoproteínas, las interacciones receptor–ligando y la señalización mediada por lectinas, con efectos posteriores sobre la diferenciación epitelial, la función de barrera y la adhesión célula–célula. Los programas alterados de O-glicosilación se asocian con frecuencia a cambios en el reconocimiento inmunitario y a fenotipos de glicanos vinculados a tumores, lo que convierte a GCNT4 en un nodo relevante para estudiar la remodelación dependiente de la glicosilación en contextos de enfermedad. Los investigadores suelen examinar la actividad de GCNT4 en vías que regulan la biosíntesis de mucinas, la ramificación de glicanos y la maduración de glicoproteínas de membrana.

GCNT4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GCNT4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GCNT4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GCNT4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GCNT4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GCNT4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GCNT4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GCNT4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GCNT4 en células tumorales con expresión de GCNT4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.