GCH-I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420509

Panoramica

Il gene murino **Gch1** codifica la GTP cicloidrolasi I (GCH-I), l’enzima limitante della velocità nella biosintesi della tetraidrobiopterina (BH4) a partire da GTP. La BH4 è un cofattore essenziale, redox-attivo, per le idrossilasi degli amminoacidi aromatici coinvolte nella produzione di catecolamine e serotonina, e per le ossido nitrico sintasi che regolano la segnalazione dell’ossido nitrico. Attraverso il controllo della disponibilità di BH4, la GCH-I collega il metabolismo delle pteridine all’omeostasi dei neurotrasmettitori, alla biologia vascolare e alla sensibilità allo stress ossidativo. Un’alterata attività dell’asse GCH-I/BH4 è stata associata a disregolazione delle vie delle monoamine e a un accoppiamento compromesso dell’ossido nitrico in modelli di disfunzione neurologica e cardiovascolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GCH-I (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gch1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gch1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gch1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GCH-I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gch1 per lo studio della segnalazione di GCH-I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gch1 critici per la funzione di GCH-I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gch1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GCH-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GCH-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gch1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GCH-I Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GCH-I (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gch1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gch1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.