Gas6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400978

Descripción general

Growth arrest–specific 6 (GAS6) codifica Gas6, un ligando secretado dependiente de vitamina K para las tirosina quinasas receptoras TAM AXL, MERTK y TYRO3. La señalización Gas6–TAM regula la eferocitosis, la atenuación de la inmunidad innata, la supervivencia celular y la migración mediante vías que suelen incluir PI3K–AKT, MAPK/ERK y NF-κB, con efectos marcados sobre la polarización de macrófagos y la homeostasis endotelial. En tejidos humanos, la actividad de GAS6 contribuye a la comunicación cruzada tromboinflamatoria y puede remodelar las interacciones tumor–inmunidad y el comportamiento metastásico a través de programas dependientes de AXL/MERTK. La desregulación de la señalización del eje GAS6/TAM se ha vinculado con la progresión del cáncer, la inflamación crónica, la fibrosis y la patobiología vascular, por lo que es un blanco frecuente en estudios mecanísticos de señalización del microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Gas6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GAS6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GAS6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GAS6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Gas6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GAS6 para la investigación de la señalización de Gas6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GAS6 críticos para la función de Gas6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GAS6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Gas6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Gas6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GAS6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Gas6 (h) y el plásmido HDR Gas6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GAS6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GAS6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.