GAS41 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425664

Panoramica

Il gene murino *Yeats4* codifica GAS41, un fattore associato alla cromatina contenente un dominio YEATS che partecipa alla regolazione trascrizionale collegando i segnali di acetilazione degli istoni al rimodellamento della cromatina. È stato riportato che GAS41 si associa a complessi epigenetici regolatori, sostenendo programmi di espressione genica dipendenti dalla RNA polimerasi II che influenzano la progressione del ciclo cellulare, la replicazione del DNA e la stabilità del genoma. Attraverso i suoi ruoli nell’organizzazione della cromatina e nel controllo della trascrizione, Yeats4/GAS41 è rilevante per studi su stati trascrizionali oncogenici, aneuploidia e vie di risposta allo stress in tessuti proliferativi. La disregolazione dei “lettori” della cromatina della famiglia YEATS è stata collegata ad alterazioni dell’attività degli enhancer e a un’espressione genica associata alla trasformazione, rendendo Yeats4 un nodo utile per ricerche meccanicistiche in oncologia e biologia dello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GAS41 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Yeats4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Yeats4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Yeats4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GAS41.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Yeats4 per lo studio della segnalazione di GAS41, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Yeats4 critici per la funzione di GAS41
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Yeats4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GAS41 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GAS41 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Yeats4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GAS41 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GAS41 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Yeats4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Yeats4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.