Plasmide Double Nickase (h) GALK1: sc-405217-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GALK1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GALK1 Double Nickase (h) et le plasmide GALK1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GALK1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GALK1 Antibody (A-2): sc-393404
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GALK1 | sc-405217-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GALK1 | sc-405217-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GALK1 code la galactokinase 1, une enzyme ATP‑dépendante qui catalyse la phosphorylation de l’α‑D‑galactose en galactose‑1‑phosphate lors de la première étape engagée de la voie de Leloir. Cette réaction soutient l’orientation des flux glucidiques vers la production d’UDP‑galactose, influençant la capacité de glycosylation ainsi que, plus largement, l’homéostasie énergétique cellulaire et l’équilibre des sucres nucléotidiques. Une activité altérée de GALK1 perturbe l’utilisation du galactose et l’équilibre des métabolites, ce qui est pertinent pour l’étude des erreurs innées du métabolisme du galactose et des effets en aval sur les réponses cellulaires au stress. En tant qu’enzyme métabolique cytosolique, GALK1 constitue un nœud expérimental accessible pour analyser la régulation dépendante des nutriments et les interactions entre voies, notamment avec la glycolyse et la biosynthèse des glycannes.
GALK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GALK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GALK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GALK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GALK1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.