galectin-9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402321-ACT

Humanes **LGALS9** kodiert **Galectin-9**, ein β-Galaktosid-bindendes Lektin, das Zell‑Zell- und Zell‑Matrix-Interaktionen durch die Erkennung glykosylierter Rezeptoren und Komponenten der extrazellulären Matrix moduliert. Galectin-9 beeinflusst Immun-Signalwege und das Entzündungsniveau, indem es Zytokinantworten, die Migration von Leukozyten und Apoptoseprogramme mitprägt, und es kann über Checkpoint-assoziierte Signalwege wie **TIM-3** den Tumor‑Immun‑Crosstalk umgestalten. Beschriebene Funktionen verknüpfen **LGALS9** mit der Regulation von T‑Zell‑Erschöpfung, der Polarisation myeloischer Zellen und der epithelial‑stromalen Kommunikation, mit Relevanz für die Krebsimmunbiologie, Autoimmunität und chronisch-entzündliche Erkrankungen. Seine Aktivität steht zudem mit Stressantwort- sowie vesikulären/sekretorischen Prozessen in Zusammenhang, die die Verfügbarkeit von löslichem Galectin-9 in Gewebe-Mikroumgebungen beeinflussen.

galectin-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LGALS9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

galectin-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LGALS9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LGALS9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen galectin-9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LGALS9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von galectin-9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des galectin-9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LGALS9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.