galectin-3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417680-ACT

Das humane Gen **LGALS3** kodiert **Galectin-3**, ein β-Galaktosid-bindendes Lektin, das Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Interaktionen, Endozytose sowie intrazelluläre Signalübertragung in epithelialen und immunologischen Kompartimenten reguliert. Galectin-3 moduliert Signalwege, die mit Entzündung und angeborener Immunität verknüpft sind, darunter die Aktivierung von Makrophagen, NF‑κB‑assoziierte Transkriptionsprogramme und Zytokin‑getriebenes Remodeling, und es kann kontextabhängig Apoptoseresistenz, Autophagie und Reaktionen auf oxidativen Stress beeinflussen. Aufgrund seiner Funktionen bei Adhäsion, Migration und dem Umsatz der extrazellulären Matrix wird LGALS3 häufig in der Fibroseforschung und bei der Kommunikation im Tumormikromilieu untersucht, ebenso wie in kardiometabolischen und neuroinflammatorischen Prozessen. Eine fehlregulierte Galectin-3-Expression wurde mit chronischen Entzündungszuständen und Progressionsphänotypen bei mehreren Krebsarten in Verbindung gebracht, was es zu einem häufig genutzten molekularen Knotenpunkt für mechanistische Analysen von Signalwegen macht.

galectin-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LGALS3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

galectin-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LGALS3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LGALS3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen galectin-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LGALS3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von galectin-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des galectin-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LGALS3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.