Plásmido CRISPR de Activación (h) galectin-1: sc-400941-ACT

LGALS1 codifica la galectina-1 humana, una lectina que se une a β-galactósidos y regula las interacciones célula–célula y célula–matriz al interactuar con receptores glicosilados en la superficie celular y en la matriz extracelular. La galectina-1 influye en la adhesión mediada por integrinas, la señalización de células inmunitarias y las respuestas al estrés, y puede modular la apoptosis, la migración y los programas angiogénicos de manera dependiente del contexto. A través de sus efectos sobre la agrupación y la señalización de receptores dependientes de glicanos, la galectina-1 afecta vías vinculadas a la inflamación, el diálogo cruzado tumor–estroma y la remodelación tisular. La expresión desregulada de LGALS1 se ha asociado con fenotipos de evasión inmunitaria, procesos fibróticos y progresión en múltiples tipos de cáncer, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en investigaciones centradas en el microambiente.

galectin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LGALS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

galectin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LGALS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LGALS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de galectin-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LGALS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de galectin-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía galectin-1 en células tumorales con expresión de LGALS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.