Plásmido Doble Nickase (h) GALC: sc-401025-NIC

El GALC humano codifica la galactocerebrosidasa, una hidrolasa lisosomal que escinde el galactosilceramida y esfingolípidos relacionados, favoreciendo el recambio de lípidos de la mielina y el catabolismo más amplio de los esfingolípidos. La actividad de GALC contribuye a las vías de reciclaje dependientes de lisosomas y ayuda a mantener la homeostasis de los lípidos de membrana en oligodendrocitos, células de Schwann y otros tipos celulares neurales. La alteración de la función de GALC modifica el procesamiento lisosomal de esfingolípidos y se asocia con patología neurodegenerativa por almacenamiento lisosomal, lo que proporciona un punto de entrada mecanístico para estudiar la mielinización, la neuroinflamación y las respuestas al estrés celular. Los modelos in vitro que alteran GALC se usan comúnmente para investigar la biología lisosomal, la remodelación del metabolismo lipídico y las consecuencias transcripcionales y proteostáticas posteriores.

GALC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GALC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GALC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GALC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GALC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.