Particules Lentivirales d'Activation (h) G6PD: sc-401019-LAC

La glucose-6-phosphate déshydrogénase (G6PD) est l’enzyme limitante de la branche oxydative de la voie des pentoses phosphates, produisant le NADPH nécessaire à la réduction du glutathion, à la détoxification des espèces réactives de l’oxygène et au maintien de l’homéostasie rédox. Dans les cellules humaines, l’activité de la G6PD soutient le métabolisme biosynthétique en fournissant du ribose-5-phosphate pour la synthèse des nucléotides ainsi que du pouvoir réducteur pour le métabolisme des lipides et de l’oxyde nitrique. Des perturbations de l’expression de la G6PD ou de son activité enzymatique influencent la sensibilité au stress oxydant, la fonction mitochondriale et la reprogrammation métabolique. Le déficit en G6PD est une enzymopathie héréditaire fréquente, associée à une sensibilité hématologique aux agressions oxydantes, et une régulation altérée de la G6PD est étudiée dans des contextes d’inflammation, de biologie des infections et de métabolisme du cancer.

Les particules d'activation lentivirales G6PD (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de G6PD dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales G6PD (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription G6PD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de G6PD. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif G6PD ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.