Gα i-1/GNAI1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400652-NIC

GNAI1 kodiert die inhibitorische G‑Protein‑α‑Untereinheit Gαi‑1, eine zentrale Komponente heterotrimerer G‑Proteine, die Signale von GPCRs an nachgeschaltete Effektoren weiterleiten. Nach Rezeptoraktivierung hemmt Gαi‑1 die Adenylylcyclase, senkt dadurch den cAMP‑Spiegel und moduliert die Funktion von Ionenkanälen sowie die Kinase‑Signalübertragung, einschließlich Knotenpunkten der PI3K/AKT‑ und MAPK‑Signalwege, über sowohl Gα‑ als auch Gβγ‑vermittelte Signale. Diese Signalprogramme steuern in vielen Zelltypen Proliferation, Differenzierung, Sekretion und chemotaktische Migration. Eine Fehlregulation der GPCR–G‑Protein‑Kopplung und veränderte cAMP‑abhängige Signalgebung wurden mit dem krebsassoziierten Rewiring von Signalwegen, Entzündungsreaktionen und neurologischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was GNAI1 zu einem nützlichen Ziel für die Analyse von Signalwegen macht.

Gα i-1/GNAI1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GNAI1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GNAI1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GNAI1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GNAI1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.