FUS/TLS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400612-ACT

FUS (FUS/TLS) codifica uma proteína de ligação a RNA/DNA que coordena múltiplas etapas da expressão génica, incluindo a regulação da transcrição, o splicing do pré‑mRNA, o transporte de mRNA e a biogénese de microRNAs. A FUS participa na resposta a danos no DNA e na manutenção do genoma por meio de interações com fatores de reparo e do acoplamento entre transcrição e processamento de RNA, e redistribui-se dinamicamente para grânulos de stress sob stress celular. Por meio dessas funções, a FUS influencia a homeostase neuronal e vias de proteostase, nas quais o controlo preciso do metabolismo de RNA é crítico. A desregulação, agregação ou mutação de FUS está fortemente associada à biologia de doenças neurodegenerativas, incluindo a esclerose lateral amiotrófica e a degeneração lobar frontotemporal, tornando-a um modelo amplamente utilizado para estudar proteinopatias de proteínas ligantes de RNA.

FUS/TLS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FUS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FUS/TLS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FUS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FUS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FUS/TLS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FUS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FUS/TLS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FUS/TLS em células tumorais com expressão de FUS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.