Plasmide CRISPR d'Activation (h) Furin: sc-400904-ACT

FURIN code la furine, une proprotéine convertase dépendante du calcium qui clive et active divers précurseurs protéiques au sein de la voie sécrétoire, notamment des hormones, des facteurs de croissance, des récepteurs et des enzymes modifiant la matrice extracellulaire. En traitant ses substrats dans le réseau trans-golgien, les endosomes et à la surface cellulaire, la furine influence des voies qui régulent la signalisation cellulaire, la différenciation, le remodelage de la matrice extracellulaire et la sécrétion régulée. Une activité dysrégulée de FURIN a été associée à des altérations de la protéostasie et à une activation aberrante d’axes de signalisation impliqués dans la biologie des cancers, l’inflammation et les mécanismes des maladies infectieuses. En tant que nœud central de la maturation des proprotéines, la furine est fréquemment étudiée pour son impact sur la disponibilité des récepteurs et ligands ainsi que sur l’amplitude des voies en aval dans des modèles de cellules humaines.

Furin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FURIN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Furin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FURIN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FURIN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Furin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FURIN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Furin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Furin dans les cellules tumorales présentant une expression de FURIN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.