Plásmido CRISPR de Activación (h) FOXP2: sc-417494-ACT

FOXP2 codifica un factor de transcripción de la familia forkhead box que coordina programas de regulación génica necesarios para la diferenciación neuronal, el crecimiento de neuritas y la plasticidad sináptica, con funciones destacadas en los circuitos corticoestriatales y cerebelosos implicados en el aprendizaje motor y la vocalización. Como regulador de unión al ADN, FOXP2 modula redes transcripcionales que controlan el estado de la cromatina, el procesamiento de ARN y la señalización dependiente de la actividad que moldean las trayectorias del neurodesarrollo. La variación genética o las alteraciones en la dosis de FOXP2 se han vinculado con trastornos del habla y del lenguaje y con fenotipos neurodel desarrollo más amplios, lo que lo convierte en un nodo útil para analizar el control transcripcional de la función de los circuitos neuronales. La modulación experimental de FOXP2 respalda estudios sobre la especificación de linajes impulsada por factores de transcripción y la remodelación de vías downstream en modelos celulares humanos.

FOXP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FOXP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FOXP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FOXP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FOXP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FOXP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FOXP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FOXP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FOXP2 en células tumorales con expresión de FOXP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.