Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXM1: sc-416676-ACT

FOXM1 (forkhead box M1) est un facteur de transcription associé à la prolifération qui coordonne la progression du cycle cellulaire en régulant les gènes requis pour la transition G1/S et l’entrée en mitose, notamment des voies contrôlant la réplication de l’ADN, l’assemblage du fuseau mitotique et la ségrégation des chromosomes. Il s’interface avec des réseaux régulateurs clés tels que la signalisation CDK–cycline et les programmes de réponse aux dommages de l’ADN afin d’équilibrer la division cellulaire et l’intégrité du génome. Une expression aberrante de FOXM1 est fréquemment observée dans des signatures transcriptionnelles liées à l’oncologie et est associée à une croissance invasive, à l’instabilité génomique et à des réponses au stress cellulaire altérées, ce qui en fait une cible largement utilisée pour l’étude de la biologie tumorale et du contrôle du cycle cellulaire. En outre, FOXM1 contribue aux programmes de remodelage tissulaire en influençant des caractéristiques épithélio-mésenchymateuses et les réponses transcriptionnelles au stress oxydatif et au stress réplicatif.

FOXM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.