Plásmido CRISPR de Activación (h) FOXJ1: sc-402226-ACT

El gen humano **FOXJ1** codifica un factor de transcripción de la familia *forkhead box* que actúa como regulador maestro de la ciliogénesis motil, coordinando el anclaje de los cuerpos basales, el ensamblaje del axonema y el programa transcripcional requerido para la diferenciación de células multiciliadas. La actividad de FOXJ1 se integra con vías de señalización del desarrollo y de diferenciación epitelial, incluidas redes transcripcionales asociadas a los cilios que determinan la identidad de las células de las vías respiratorias y de las células ependimarias. La expresión desregulada de FOXJ1 o de los programas génicos ciliares se asocia con una depuración mucociliar deficiente y con fenotipos más amplios relacionados con ciliopatías, lo que lo hace relevante para estudios del epitelio respiratorio, la función del tracto reproductor y la homeostasis del líquido cefalorraquídeo. Como proteína nuclear que se une al ADN, FOXJ1 constituye un punto de entrada manejable para investigar cómo el control transcripcional de genes ciliares influye en la función de barrera, el flujo de fluidos y los mecanismos de defensa innata.

FOXJ1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FOXJ1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FOXJ1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FOXJ1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FOXJ1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FOXJ1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FOXJ1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FOXJ1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FOXJ1 en células tumorales con expresión de FOXJ1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.