Plásmido CRISPR de Activación (m) FOXC1: sc-421637-ACT

Foxc1 codifica el factor de transcripción de la familia forkhead box FOXC1, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que controla el patrón del desarrollo, las decisiones de destino celular y los programas de diferenciación. En sistemas murinos, FOXC1 integra señales a través de redes transcripcionales implicadas en interacciones mesénquima–epitelio, remodelación de la matriz extracelular y vías impulsadas por morfógenos como TGF-β/BMP y WNT para dar forma a la organogénesis y a la homeostasis tisular. La alteración de la dosis o de la actividad reguladora de FOXC1 se relaciona con fenotipos congénitos del segmento anterior y craneofaciales, y se ha asociado con una identidad celular desregulada y firmas de expresión génica invasiva en biología del cáncer. Estas propiedades hacen de FOXC1 un nodo útil para diseccionar circuitos de regulación génica que gobiernan el desarrollo, estados tipo célula madre y respuestas al microambiente.

FOXC1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Foxc1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FOXC1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Foxc1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Foxc1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FOXC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Foxc1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FOXC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FOXC1 en células tumorales con expresión de Foxc1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.