Plasmide CRISPR/Cas9 KO FMNL3 (h): sc-406244

Présentation

FMNL3 (formin-like protein 3) est un facteur de nucléation et d’élongation de l’actine régulé par les GTPases de la famille Rho, qui coordonne le remodelage du cytosquelette d’actine cortical. Il favorise la formation de filopodes et de lamellipodes, régule la polarité cellulaire et contribue à la migration dirigée via des voies liées à la signalisation CDC42/RAC et à la dynamique du cytosquelette. L’activité de FMNL3 influence la protrusion membranaire, le renouvellement des adhésions et des processus de trafic intracellulaire dépendant de l’assemblage de l’actine. Une expression ou une signalisation de FMNL3 dérégulée a été associée, dans plusieurs systèmes modèles, à des phénotypes pertinents pour l’invasion et la métastase des cellules tumorales, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la motilité et du contrôle du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FMNL3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FMNL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FMNL3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FMNL3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FMNL3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FMNL3 pour l'étude de la signalisation de FMNL3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FMNL3 essentiels à la fonction de FMNL3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FMNL3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FMNL3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FMNL3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FMNL3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FMNL3 plasmide HDR (h) et le FMNL3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FMNL3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FMNL3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.