FMNL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404817-ACT

A proteína 1 do tipo formina (FMNL1) é um fator de nucleação e elongação de actina regulado por GTPases da família Rho, que sustenta a remodelação dinâmica do citoesqueleto cortical. Ela contribui para a formação de filopódios, a polaridade celular, a adesão e a migração ao coordenar a montagem de filamentos de actina a jusante de vias de sinalização como RhoA e Cdc42. A FMNL1 é expressa de forma proeminente em linhagens hematopoéticas e é frequentemente estudada no contexto do tráfego de células imunes, da fagocitose e da organização da sinapse imune. A desregulação do controle do citoesqueleto envolvendo a FMNL1 tem sido associada a alterações na função de leucócitos e tem sido investigada em doenças inflamatórias e hematológicas como um mecanismo que impacta a motilidade celular e a infiltração tecidual.

FMNL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FMNL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FMNL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FMNL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FMNL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FMNL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FMNL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FMNL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FMNL1 em células tumorais com expressão de FMNL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.