Plásmido Doble Nickase (h) Flotillin-2: sc-401200-NIC

FLOT2 codifica la flotilina-2, una proteína andamiaje asociada a membrana, enriquecida en balsas lipídicas y microdominios tipo caveola, que organiza complejos de señalización de receptores y regula la endocitosis, el tráfico de membrana y la dinámica del citoesqueleto de actina. La flotilina-2 participa en procesos como la internalización independiente de clatrina, la propagación de señales desde receptores de factores de crecimiento y el control espacial de la actividad de las vías MAPK/ERK y PI3K–AKT. A través de su papel en la organización de microdominios de la membrana plasmática y en el transporte vesicular, FLOT2 influye en programas de adhesión, migración y proliferación celular relevantes para la biología tumoral, la señalización inmunitaria y la neurobiología. La expresión o localización alteradas de la flotilina-2 se han asociado con cambios en el comportamiento invasivo y en la señalización de respuesta al estrés, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de señalización oncogénica y organización de membranas.

Flotillin-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FLOT2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FLOT2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FLOT2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FLOT2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.