fish CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401277

Übersicht

SH3PXD2A kodiert das Adapterprotein TKS5, ein Substrat von Src, das aktinregulierende und signalgebende Komplexe organisiert, die für die Bildung von Podosomen und Invadopodien erforderlich sind. Über seine SH3‑Domänen und die PX‑Domäne koordiniert TKS5 PI3K‑abhängige Membrandynamik, die Aktinpolymerisationsmaschinerie und den Transport von Metalloproteasen, um den Umbau der extrazellulären Matrix und die Zellmigration zu unterstützen. Die durch SH3PXD2A getriebene Umorganisation des Zytoskeletts ist mit invasivem Zellverhalten und veränderter Gewebearchitektur verknüpft und damit relevant für Studien zur Tumorprogression, zum fibroseassoziierten Gewebeumbau und zur Motilität vaskulärer Zellen. In immunologischen und stromalen Kontexten beeinflusst eine Störung von TKS5 Adhäsionsstrukturen und Programme der gerichteten Migration, die mit der Src/FAK‑Signalgebung und Signalwegen der Rho‑Familie von GTPasen zusammenlaufen.

Das fish CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SH3PXD2A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SH3PXD2A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SH3PXD2A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die fish-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SH3PXD2A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der fish-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SH3PXD2A-Exone abzielen, die für die fish-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SH3PXD2A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom fish CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom fish CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SH3PXD2A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das fish HDR-Plasmid (h) und fish HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SH3PXD2A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SH3PXD2A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.