FIP1L1 Plasmide Double Nickase (h): sc-413438-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FIP1L1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FIP1L1 Double Nickase Plasmid (h) e il FIP1L1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FIP1L1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FIP1L1 Antibody (C-10): sc-398392
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FIP1L1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-413438-NIC | 20 µg | $410.00 |
FIP1L1 codifica una subunità centrale del complesso CPSF (cleavage and polyadenylation specificity factor), che partecipa alla maturazione dell’estremità 3′ dei pre‑mRNA, inclusa la selezione del sito di poliadenilazione (poly(A)) e l’accoppiamento tra il taglio e la poliadenilazione. Attraverso interazioni con la poli(A) polimerasi e altri fattori di processamento, FIP1L1 contribuisce a modellare la diversità delle isoforme trascrittomiche e la stabilità dell’mRNA, influenzando così programmi di espressione genica legati a proliferazione e differenziamento. La disregolazione del processamento dell’RNA mediato da FIP1L1 è rilevante per la riprogrammazione trascrizionale oncogena, e le riarrangiamenti cromosomici che coinvolgono FIP1L1 sono ben descritti nelle neoplasie mieloidi come driver di un segnalamento chinasico aberrante. Queste caratteristiche rendono FIP1L1 un nodo utile per studiare la formazione dell’estremità 3′ dell’RNA, la poliadenilazione alternativa e le conseguenze a valle sullo stato cellulare.
FIP1L1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FIP1L1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FIP1L1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FIP1L1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FIP1L1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.