Plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-3 (m): sc-432105
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Fibulin-3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Fibulin-3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Fibulin-3 Antibody (mab3-5): sc-33722
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-3 (m) | sc-432105 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Efemp1 code la fibuline‑3, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui s’associe aux fibres élastiques et à des composants de la membrane basale afin de réguler l’organisation de la matrice, l’adhésion cellulaire et la biomécanique des tissus. La fibuline‑3 influence le remodelage de la matrice extracellulaire via des interactions avec les métalloprotéinases et leurs inhibiteurs, modulant la protéostasie et des signaux qui affectent l’angiogenèse et la migration cellulaire. Dans les tissus murins, Efemp1 contribue à l’homéostasie du tissu conjonctif et du système vasculaire, et a été associé à des phénotypes dégénératifs et fibrosants lorsqu’il est dérégulé. Ces propriétés font d’Efemp1 une cible utile pour disséquer les voies dépendantes de la matrice extracellulaire impliquées dans le développement, le vieillissement et le remodelage associé à l’inflammation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Efemp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Efemp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Efemp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Fibulin-3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Efemp1 pour l'étude de la signalisation de Fibulin-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Efemp1 essentiels à la fonction de Fibulin-3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Efemp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Fibulin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Fibulin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Efemp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Fibulin-3 plasmide HDR (m) et le Fibulin-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Efemp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Efemp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.