Plásmido Doble Nickase (h) Fibulin-1: sc-401754-NIC

FBLN1 codifica la fibulina‑1, una glucoproteína secretada de la matriz extracelular que se asocia con las fibras elásticas, componentes de la membrana basal y múltiples proteoglucanos para influir en la organización de la matriz y la mecánica tisular. La fibulina‑1 participa en procesos de adhesión célula–matriz y de remodelación que se entrecruzan con la señalización vinculada a integrinas, los programas de reparación de heridas y la homeostasis de la matriz extracelular vascular. Se han descrito alteraciones en la expresión de FBLN1 y en el depósito de matriz en contextos de fibrosis y remodelado cardiovascular, y una arquitectura desregulada de la matriz extracelular también está implicada en la biología del microambiente tumoral. Como resultado, FBLN1 se estudia con frecuencia como un nodo estructural y regulador que conecta el ensamblaje de la matriz extracelular con la migración celular, la proliferación y la mecanotransducción.

Fibulin-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FBLN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FBLN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FBLN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FBLN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.