Partículas Lentivirales de Activación (h) Fibronectin: sc-400082-LAC

FN1 codifica la fibronectina, una glicoproteína de alto peso molecular de la matriz extracelular que se ensambla en redes fibrilares y media la adhesión, la migración y la mecanotransducción celular mediante la interacción con integrinas. La fibronectina coordina la organización de la matriz extracelular, la dinámica de las adhesiones focales y la remodelación del citoesqueleto, influyendo en vías como la señalización integrina–FAK/SRC, la regulación de las GTPasas Rho y la remodelación de la matriz asociada a TGF-β. Como componente central de la reparación de heridas y la homeostasis tisular, la fibronectina contribuye a la transición epitelio-mesénquima, a programas angiogénicos y a interacciones con el estroma. La expresión desregulada de FN1 y los cambios en el depósito de la matriz de fibronectina se han implicado en la remodelación fibrótica, en microambientes inflamatorios y en el diálogo cruzado tumor–estroma relevante para fenotipos asociados a la metástasis.

Las partículas de activación lentiviral Fibronectin (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de FN1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Fibronectin (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción FN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Fibronectin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo FN1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.