Plásmido Doble Nickase (h) Fibrinogen β: sc-401819-NIC

FGB codifica la cadena beta del fibrinógeno, un componente esencial del hexámero de fibrinógeno (cadenas Aα, Bβ y γ) secretado principalmente por los hepatocitos y escindido por la trombina durante la fase terminal de la cascada de coagulación. Tras la activación, los monómeros de fibrina se polimerizan y son entrecruzados por el factor XIII para formar un coágulo de fibrina estable, vinculando la hemostasia con la reparación de heridas y la remodelación de la matriz extracelular. El fibrinógeno y la fibrina también interactúan con receptores plaquetarios (p. ej., la integrina αIIbβ3) y modulan la señalización inflamatoria, influyendo en el reclutamiento de leucocitos y en la biología vascular. La alteración de la expresión de FGB o las variaciones en su secuencia se asocian con defectos cuantitativos o cualitativos del fibrinógeno y contribuyen a una formación de coágulos desregulada, lo que aporta un punto de entrada mecanístico para estudios de trombosis, fenotipos hemorrágicos y disfunción vascular asociada a la inflamación.

Fibrinogen β El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FGB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FGB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FGB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FGB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.