Fibrinogen α CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400793-ACT

FGA kodiert die Fibrinogen‑α‑Kette, eine zentrale Komponente des Fibrinogen‑Hexamers im Plasma, das während der Gerinnung durch Thrombin proteolytisch zu Fibrin umgewandelt wird. Über die Gerinnselbildung hinaus steht Fibrin(ogen) in Wechselwirkung mit der Thrombozytenaggregation, integrinvermittelter Adhäsion und dem Umbau der extrazellulären Matrix und verknüpft so Hämostase mit Entzündung und Wundheilung. Die Regulation der FGA-Expression in Hepatozyten und im Akute‑Phase‑Kontext beeinflusst die zirkulierenden Fibrinogenspiegel sowie nachgelagerte Signalprozesse in Thrombin/PAR‑ und fibrinolytischen Signalwegen. Eine dysregulierte Fibrinogenproduktion oder -prozessierung ist mit erblichen Fibrinogenerkrankungen assoziiert und trägt zu thrombotischen und entzündlichen Krankheitsphänotypen bei, die für die kardiovaskuläre Forschung und die Leberbiologie relevant sind.

Fibrinogen α Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FGA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Fibrinogen α Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FGA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FGA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Fibrinogen α-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FGA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Fibrinogen α-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Fibrinogen α-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FGA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.