Plásmido CRISPR de Activación (h) FGF-10: sc-417825-ACT

FGF10 codifica el factor de crecimiento de fibroblastos 10 (FGF-10), un ligando paracrino secretado que señaliza principalmente a través de FGFR2b para regular el diálogo epitelio–mesénquima durante la organogénesis y la homeostasis tisular en el adulto. FGF-10 activa vías canónicas de receptores tirosina cinasa, incluidas RAS–MAPK/ERK, PI3K–AKT y la señalización mediada por PLCγ, para controlar la proliferación, la migración, la supervivencia y la morfogénesis por ramificación. La desregulación de la señalización FGF10–FGFR2b se ha implicado en un desarrollo anómalo de pulmones y glándulas, una reparación deficiente de heridas y programas alterados de crecimiento epitelial relevantes para trastornos congénitos y la biología del cáncer. Como morfógeno del desarrollo y factor de nicho, FGF-10 se estudia con frecuencia en el epitelio de las vías respiratorias, en la biología de las glándulas mamaria y salival, y en modelos de señalización estromal–epitelial.

FGF-10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FGF10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FGF-10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FGF10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FGF10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FGF-10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FGF10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FGF-10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FGF-10 en células tumorales con expresión de FGF10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.