Ferrochelatase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402043

Descripción general

FECH codifica la ferroquelatasa humana, una enzima de la membrana interna mitocondrial que cataliza la inserción de hierro ferroso en la protoporfirina IX para producir hemo, el paso final de la vía de biosíntesis de porfirinas/hemo. Al controlar la disponibilidad de hemo, la ferroquelatasa influye en la maduración eritroide, la respiración mitocondrial, el equilibrio redox y el ensamblaje de hemoproteínas. La alteración de la actividad de FECH se asocia con acumulación de porfirinas y con una homeostasis del hemo modificada, con relevancia para la protoporfiria eritropoyética y para fenotipos más amplios de estrés metabólico en células con alta demanda de hemo. Por ello, FECH se estudia ampliamente en biología mitocondrial, manejo del hierro y metabolismo de porfirinas, incluyendo las respuestas de la vía frente a perturbaciones oxidativas y metabólicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ferrochelatase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FECH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FECH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FECH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ferrochelatase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FECH para la investigación de la señalización de Ferrochelatase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FECH críticos para la función de Ferrochelatase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FECH para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ferrochelatase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Ferrochelatase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FECH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ferrochelatase (h) y el plásmido HDR Ferrochelatase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FECH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FECH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.