ferritin light chain Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400924

Panoramica

FTL codifica la catena leggera della ferritina, un componente fondamentale dell’eteropolimero della ferritina che sequestra e mineralizza il ferro per mantenere l’omeostasi del ferro cellulare e limitare lo stress ossidativo guidato dal ferro. Tamponando i pool di ferro labile, FTL influenza l’equilibrio redox, la funzione mitocondriale e la segnalazione responsiva al ferro attraverso la rete regolatoria IRP/IRE, coordinando l’immagazzinamento del ferro con il suo assorbimento e utilizzo. Alterazioni nella composizione o nell’espressione della ferritina possono modificare la sensibilità alla ferroptosi e le risposte allo stress infiammatorio cambiando la disponibilità di ferro e la propensione alla perossidazione lipidica. La disregolazione di FTL e della biologia della ferritina è stata collegata a neurodegenerazione, a una gestione anomala del ferro associata all’anemia e al rimodellamento metabolico correlato al cancro, rendendo FTL un nodo utile per studiare fenotipi cellulari dipendenti dal ferro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ferritin light chain (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FTL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FTL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FTL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ferritin light chain.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FTL per lo studio della segnalazione di ferritin light chain, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FTL critici per la funzione di ferritin light chain
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FTL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ferritin light chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ferritin light chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FTL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ferritin light chain Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ferritin light chain (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FTL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FTL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.