FEM1B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420316

Descripción general

Fem1b codifica FEM1B, una proteína conservada que contiene repeticiones de anquirina e implicada en la proteostasis dependiente de ubiquitina y en las respuestas celulares al estrés. FEM1B se ha relacionado con el reconocimiento de sustratos en vías de ligasas E3 de ubiquitina y contribuye a la regulación de la apoptosis y de procesos asociados al ciclo celular, con efectos aguas abajo sobre la homeostasis mitocondrial y la señalización metabólica. En sistemas murinos, la función de Fem1b se ha estudiado en contextos como el equilibrio energético, la regulación endocrina y el mantenimiento tisular, lo que la hace relevante para trabajos mecanísticos sobre disfunción metabólica y fenotipos de adaptación al estrés. La alteración de la actividad de FEM1B también se ha asociado con cambios en redes de control de calidad proteica que pueden influir en la susceptibilidad a modelos de enfermedades degenerativas y metabólicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FEM1B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fem1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fem1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fem1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FEM1B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fem1b para la investigación de la señalización de FEM1B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fem1b críticos para la función de FEM1B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fem1b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FEM1B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FEM1B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fem1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FEM1B (m) y el plásmido HDR FEM1B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fem1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fem1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.