FBXW2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406409

Panoramica

FBXW2 codifica una proteina contenente un dominio F-box e ripetizioni WD che funge da componente di riconoscimento del substrato dei complessi ligasi E3 dell’ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), contribuendo a indirizzare proteine specifiche verso l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale. Attraverso il turnover regolato di fattori associati alla segnalazione e al ciclo cellulare, FBXW2 contribuisce alla proteostasi e alla regolazione fine delle vie che controllano proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. Un’alterazione della regolazione mediata dall’ubiquitina è una caratteristica comune della segnalazione oncogenica e di altri disturbi in cui l’omeostasi proteica è compromessa, rendendo FBXW2 un nodo rilevante per studi meccanicistici sulla riconfigurazione delle vie di segnalazione. FBXW2 è pertanto di interesse per indagare come programmi di degradazione mirata influenzino il fenotipo cellulare in contesti rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FBXW2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FBXW2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FBXW2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FBXW2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FBXW2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FBXW2 per lo studio della segnalazione di FBXW2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FBXW2 critici per la funzione di FBXW2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FBXW2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FBXW2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FBXW2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FBXW2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FBXW2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FBXW2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FBXW2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FBXW2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.