Plásmido CRISPR de Activación (h) FBXO3: sc-403436-ACT

FBXO3 codifica una proteína con dominio F-box que funciona como componente de reconocimiento de sustratos de los complejos de ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), ayudando a dirigir proteínas específicas para su ubiquitinación y degradación por el proteasoma. Mediante la degradación proteica regulada, FBXO3 puede influir en la señalización inmunitaria innata e inflamatoria, incluidas vías que convergen en programas transcripcionales dependientes de NF-κB. En la literatura, la actividad alterada de FBXO3 se ha vinculado con respuestas de citocinas desreguladas y estados celulares asociados al estrés, lo que la hace relevante para estudios de la homeostasis inmunitaria y los mecanismos de enfermedad asociados a la inflamación. Como parte del sistema ubiquitina–proteasoma, FBXO3 también es útil para explorar redes de proteostasis y el control dependiente del contexto de intermediarios de señalización.

FBXO3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FBXO3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FBXO3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FBXO3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FBXO3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FBXO3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FBXO3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FBXO3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FBXO3 en células tumorales con expresión de FBXO3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.