Fatso Plasmide Double Nickase (m): sc-424024-NIC

Il gene Fto del topo codifica la proteina Fatso, una diossigenasi dipendente da Fe(II)/2‑ossoglutarato che agisce come demetilasi dell’RNA, con preferenza per la N6‑metiladenosina (m6A) e per altre adenosine metilate correlate. Modulando lo stato di metilazione dell’RNA, Fatso influenza lo splicing, la stabilità, la traduzione e la degradazione dell’mRNA, plasmando così programmi di espressione genica che controllano l’equilibrio energetico e le transizioni di stato cellulare. L’attività di Fto si integra con reti di segnalazione metabolica e di sensing dei nutrienti, incluse vie collegate all’adipogenesi e alla funzione mitocondriale. Una disregolazione dell’espressione o della funzione di Fto è stata associata a tratti legati all’obesità e a fenotipi metabolici, rendendolo un bersaglio ampiamente utilizzato negli studi sulla regolazione epitranscrittomica e sui meccanismi di malattia guidati dal metabolismo.

Fatso Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Fto nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Fto. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Fto. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Fto interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.