Plasmide Double Nickase (h) FAT4: sc-405268-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FAT4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FAT4 Double Nickase (h) et le plasmide FAT4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FAT4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FAT4 Antibody (1654CT645.1.70): sc-517330
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FAT4 | sc-405268-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FAT4 | sc-405268-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FAT4 code une grande cadhérine atypique qui agit comme un récepteur de surface de type protocadhérine, régulant la signalisation dépendante du contact, la polarité planaire des cellules et l’architecture tissulaire. FAT4 participe au contrôle, via la voie Hippo, de l’activité de YAP/TAZ et coordonne l’organisation du cytosquelette, la division cellulaire orientée et la morphogenèse épithéliale. La perturbation de FAT4 a été associée à des défauts de mise en place des patrons développementaux et à une altération du contrôle de la croissance, et les variations de FAT4 sont liées à des syndromes congénitaux ainsi qu’à la biologie tumorale dans de multiples contextes tissulaires. En tant que régulateur de la polarité et de l’adhésion, FAT4 est largement étudié pour comprendre les mécanismes qui gouvernent la taille des organes, la différenciation et le comportement invasif.
FAT4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FAT4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FAT4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FAT4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FAT4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.